DNA测序最早的两种技术化学降解法和双脱氧终止法不是都需要单链来进行基础的物质反应吗,但是单链应该只是两条链中的一条吧。在胶图的显影过程中应该是要DNA的裂解与合成片段具有一定的量我们才能看到吧。那么如何保证进行反应的单链都是同样的呢,是通过什么样的方法啊。
我知道化学法会在磷酸基团处(5‘)进行标记然后切割一段,但是两条链有两个标记端,如何保证那么多DNA片段被切掉的都是同一端(指双链的),有是如何分离出单链进行裂解的啊。
终止法可以通过单引物来实现,但是在自动化的时候不要通过通过单链来保证了吗?那如何纯化出序列单一的单链啊。
突出这个问题是因为如果是双链两条链都发生反应的话,那不就因为互补的原因,产生重复长度片段,比如说AT,就没办法判断究竟是次链的T使之停留在A处,还是彼链导致的了吗?
我知道化学法会在磷酸基团处(5‘)进行标记然后切割一段,但是两条链有两个标记端,如何保证那么多DNA片段被切掉的都是同一端(指双链的),有是如何分离出单链进行裂解的啊。
终止法可以通过单引物来实现,但是在自动化的时候不要通过通过单链来保证了吗?那如何纯化出序列单一的单链啊。
突出这个问题是因为如果是双链两条链都发生反应的话,那不就因为互补的原因,产生重复长度片段,比如说AT,就没办法判断究竟是次链的T使之停留在A处,还是彼链导致的了吗?